Arc の @LukeGilbertSF & @pdhsu 研究所から本日 @NatureBiotech 年に発表された研究は、DNA 切断や細胞の修復機構に依存しない操作された組換えを使用して、大きな DNA 配列をゲノムに挿入する新しい方法を提示しています。

リコンビナーゼは、CRISPRのように二本鎖切断を作成することなく、ゲノムの特定の部位にDNAを挿入できる酵素です。 しかし、既存のリコンビナーゼには限界があり、効率は~5%しか管理できず、多くの場合、何百ものオフターゲット部位にヒットします。

チームは、効率と特異性の両方を向上させるための包括的なエンジニアリング戦略を開発し、進化的スクリーニングを組み合わせてより良い変異を見つけ、どの変異が連携して機能するかを予測し、酵素をdCas9に融合させて正しい場所に誘導しました。

彼らは何千もの変異をテストして、どの変異が酵素を改善するかを特定し、計算モデルを使用して変異の組み合わせがパフォーマンスにどのような影響を与えるかを予測し、高度に最適化されたバリアントを迅速に構築できるようにしました。

最良のバリアントは、97%の特異性と最大53%の効率を達成し、開始酵素に比べて精度が7.5倍向上し、効率が12倍向上しました。 これは、研究者が最大の効率、特異性、またはその両方のバランスをとるために最適化されたバリアントを選択できることを意味します。